محیط کشت
- 2
•محیط کشت چیست؟ •محیط کشت مناسب چه ویژگی های دارد؟ •خرید محیط کشت سلول •محیط کشت برند مرک و سیگما آلدریچ و گیبکو •کشت سلول چیست؟ •دمای نگه داری انواع محیط کشت چند درجه سانتی گراد است ؟ • شرایط آزمایشگاه های مخصوص کشت چگونه است؟ • محیط کشت چگونه ساخته میشود ؟ • فرق محیط کشت پودری با محیط کشت آماده چیست؟ • انواع گوناگون محیط کشت •محیط کشت برند گیبکو •محیط کشت برند سیگماآلدریچ •محیط کشت برند مرک کشت سلولی یکی از تکنیک های اصلی در علوم زیستی است. این اصطلاح کلی است که برای حذف سلولها، بافتها یا اندامها از یک حیوان یا گیاه و قرار دادن آنها در یک محیط مصنوعی مناسب برای بقا و/یا تکثیر آنها استفاده میشود. الزامات محیطی اساسی برای رشد بهینه سلول ها عبارتند از: دمای کنترل شده، بستری برای اتصال سلولی، و محیط رشد مناسب و انکوباتور که PH و اسمولالیته صحیح را حفظ کند. مهمترین و حیاتی ترین مرحله در کشت سلولی، انتخاب محیط رشد مناسب برای کشت آزمایشگاهی است. محیط رشد یا محیط کشت مایع یا ژلی است که برای حمایت از رشد میکروارگانیسم ها، سلول ها یا گیاهان کوچک طراحی شده است. محیط کشت سلولی به طور کلی منبع مناسبی از انرژی و ترکیباتی است که چرخه سلولی را تنظیم می کند. یک محیط کشت معمولی از مکملی از اسیدهای آمینه، ویتامین ها، نمک های معدنی، گلوکز و سرم به عنوان منبع فاکتورهای رشد، هورمون ها و عوامل چسبندگی تشکیل شده است. این محیط علاوه بر مواد مغذی به حفظ pH و اسمولالیته نیز کمک می کند.
محیط کشت طبیعی: محیط طبیعی فقط از مایعات بیولوژیکی طبیعی تشکیل شده است. محیط های طبیعی برای طیف وسیعی از کشت سلول های حیوانی بسیار مفید و مناسب هستند. عیب اصلی رسانه های طبیعی، تکرارپذیری ضعیف آن به دلیل عدم آگاهی از ترکیب دقیق این رسانه های طبیعی است.
محیط کشت مصنوعی: محیط های مصنوعی یا مصنوعی با افزودن مواد مغذی (اعم از آلی و معدنی)، ویتامین ها، نمک ها، فازهای گازی O2 و CO2، پروتئین های سرم، کربوهیدرات ها، کوفاکتورها تهیه می شوند. رسانه های مصنوعی مختلف برای خدمت به یک یا چند مورد از اهداف زیر ابداع شده اند: 1) بقای فوری (محلول نمک متعادل، با pH خاص و فشار اسمزی). 2) بقای طولانی مدت (محلول نمک متعادل همراه با فرمولاسیون مختلف ترکیبات آلی و/یا سرم). 3) رشد نامحدود؛ 4) توابع تخصصی.
محیط های مصنوعی به چهار دسته تقسیم می شوند:
سرم حاوی مدیا سرم جنین گاوی رایج ترین مکمل در محیط های کشت سلولی حیوانی است. این به عنوان یک مکمل کم هزینه برای ارائه یک محیط کشت بهینه استفاده می شود. سرم برای مواد مغذی حساس یا نامحلول در آب، هورمونها و فاکتورهای رشد، مهارکنندههای پروتئاز، حاملها یا شلاتورها را فراهم میکند و بخشهای سمی را متصل و خنثی میکند.
محیط بدون سرم وجود سرم در محیط ها دارای اشکالات زیادی است و می تواند منجر به تفسیرهای نادرست جدی در مطالعات ایمونولوژیکی شود. تعدادی از محیط های بدون سرم توسعه یافته است.این محیط ها به طور کلی به طور خاص برای حمایت از کشت یک نوع سلولی فرموله می شوند، مانند جایگزینی سرم ناکاوت و ناکاوت DMEM از Thermo Fisher Scientific، و محیط mTESR از Stem Cell Technologies، برای سلول های بنیادی و شامل مقادیر تعریف شده ای از خالص شده است که معمولاً توسط فاکتورهای رشد خالص، و در غیر این صورت پروتئین های سرم، لیپوپروت های دیگر ارائه می شوند. از آنجایی که اجزای موجود در این محیطها شناخته شدهاند، به این محیط ها «محیط کشت تعریفشده» نیز گفته میشود.
محیط های شیمیایی: این محیط ها حاوی مواد معدنی و ارگانیک فوق خالص بدون آلودگی هستند و همچنین ممکن است حاوی مواد افزودنی پروتئین خالص مانند فاکتورهای رشد باشند. ترکیبات آنها در باکتری ها یا مخمرها توسط مهندسی ژنتیک با افزودن ویتامین ها، کلسترول، اسیدهای آمینه خاص و اسیدهای چرب تولید می شوند.
محیط های بدون پروتئین: محیط های بدون پروتئین حاوی هیچ پروتئینی نیستند و فقط حاوی ترکیبات غیر پروتئینی هستند. در مقایسه با محیطهای حاوی سرم، استفاده از محیطهای بدون پروتئین باعث رشد بهتر سلولی و بیان پروتئین میشود و خالصسازی پایین دست هر محصول بیانشده را تسهیل میکند. فرمولاسیون هایی مانند MEM، RPMI-1640 بدون پروتئین هستند و در صورت نیاز مکمل پروتئین ارائه می شود.
در کل مولفه های اساسی محیط های کشت حاوی مخلوطی از اسیدهای آمینه، گلوکز، نمک ها، ویتامین ها و سایر مواد مغذی هستند و به صورت پودر یا مایع از عرضه کنندگان تجاری همانند برند مرک، سیگماآلدریچ ، گیبکو و میرمدیا در دسترس هستند. الزامات برای این اجزا در بین رده های سلولی متفاوت است و این تفاوت ها تا حدی مسئول تعداد گسترده فرمولاسیون های متوسط است.